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BCA法(bicinchoninic acid)是一种常用的测蛋白质浓度的方法,本文介绍了BCA法蛋白质定量的原理,优缺点,以及BCA的实验流程。 1.BCA法原理 BCA法基于双缩脲原理,碱性条件下蛋白质将Cu2+还原成Cu+,BCA鳌合Cu+作为显色剂,产生蓝紫色并在562nm有吸收峰,单价Cu+与蛋白质呈剂量相关性。可以根据待测蛋白在562nm处的吸光度计算待测蛋白浓度。 2.BCA法优缺点分析 优点 缺点 ①.灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg;②.不易受一般浓度去污剂的干扰,抗干扰能力强。③.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。 ①.可受螯合剂,高浓度还原剂的影响。3.BCA法实验流程 ①标准曲线的绘制:取一块酶标板,按下表加入试剂。 孔号 蛋白标准溶液(μL) 去离子水(μL) 对应蛋白含量(μg) 0 0 20 0 1 1 19 0.5 2 2 18 1.0 3 4 16 2.0 4 8 12 4.0 5 12 8 6.0 6 16 4 8.0 7 20 0 10.0②根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀。 ③各孔加入200μL BCA工作液。 ④把酶标板放在振荡器上振荡30s,37℃放置30min,然后在562nm下比色测定。以蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。 ⑤稀释待测样品至合适浓度,使样品稀释液总体积为20μL,加入BCA工作液200μL,充分混匀,37℃放置30min后,以标准曲线0号管做参比,在562nm波长下比色,记录吸光值。 ⑥根据所测样品的吸光值,利用计算公式计算出蛋白样品的实际浓度(单位:μg/μL)。 相关服务 7个工作日交付 原核表达服务 无甲醇诱导体系 酵母表达服务 sf9、sf21、 High5 昆虫表达服务 CHO、HEK293 哺乳表达服务猜您想看: Lowry法:Folin-酚试剂法实验原理、实验方法以及实验要点分析 Bradford法:考马斯亮蓝染色法原理、优缺点分析、实验流程以及注意事项 瞬蓝SDS-PAGE染色液:5分钟出结果,无毒,无味,无需脱色 |
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