体外抗菌活性检测

1、抑菌圈测试

1.1块体类—薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等

送样量：至少3个/种菌。

制样要求：金属块、凝胶类样本须制备成统一大小的圆形/方形，建议制备直径为6-10 mm圆形。布料、纸片类样本可代为裁剪，默认制备直径为6 mm。

注：凝胶样本须保证样本在培养条件下（一般为37℃）不融化。

1.2液体类

送样量：根据测试时样本浓度而定

①若采用原液测试，则样本量为1 mL/种菌；

②若采用稀释后样本测试，则须告知稀释倍数及稀释液，样本量为1 mL/稀释倍数/种菌。

1.3粉末类

送样量：因不同样本密度不同，无法保证每个加样孔均能加入等量样本，故建议样本做分散液，按照等体积加样(每个孔最大加样量为0.2 mL)，能提升样本量的一致性。需要提供质量/体积比（选择合适的样本分散液），样本量为质量/体积×1 mL/种菌。

如果不可使用分散液，需要预试，样本量可联系本公司人员确认。

2、OD值测试

2.1块体类—薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等

送样量：需要提供样本与菌液的培养体系。比如X g样本/mL菌液，样本量为4X g/种菌。

2.2液体类（要求样本溶液无色或者淡色）

送样量：根据测试时样本的溶剂和浓度而定

①若溶剂具备杀菌性（如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等），推荐提供样本浓度为50倍测试浓度，样本量为0.1 mL/种菌。

举例：测试材料的溶剂为DMSO，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本0.1 mL/种菌。

②若溶剂不具备杀菌性（如PBS、纯水、生理盐水等），推荐提供样本浓度为10倍测试浓度，样本量为0.4 mL/种菌。

举例：测试材料的溶剂为纯水，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本0.4 mL/种菌。

注：如果提供样本原液浓度高于推荐浓度，可按比例计算样本量。

2.3粉末类

送样量：需要提供样本与菌液的培养体系。比如X g样本/mL菌液，样本量为4X g/种菌。

3、平板涂布计数测试

3.1块体类—薄膜、金属块、镀膜玻璃等（具备一定的表面积）

测试方法参考国标GBT 31402-2015 塑料 塑料表面抗菌性能试验方法（https://max.book118.com/html/2017/1123/141231780.shtm）、JCT 1054-2007 镀膜抗菌玻璃（https://www.antpedia.com/standard/5144389-1.html）

送样量：样本量为1个/次重复/种菌

样本尺寸：标准尺寸大小5×5cm，建议最小尺寸1×1cm

3.2液体类

送样量：根据测试时样本的溶剂和浓度而定

①若溶剂具备杀菌性（如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等），推荐提供样本浓度为50倍测试浓度，样本量为0.03 mL/次重复/种菌。

举例：测试材料的溶剂为DMSO，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本0.03 mL/次重复/种菌。

②若溶剂不具备杀菌性（如PBS、纯水、生理盐水等），推荐提供样本浓度为10倍测试浓度，样本量为0.1 mL/次重复/种菌。

举例：测试材料的溶剂为纯水，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本0.1 mL/次重复/种菌。

3.3粉末类

送样量：需要提供样本与菌液的培养体系。比如X g样本/mL菌液，样本量为X g/次重复/种菌。

4、MIC/MBC测试

4.1粉末/液体类（要求样本溶液，完全溶解且无色或者淡色）-微孔板法

送样量：根据测试时样本的溶剂和初始工作浓度而定

①若溶剂具备杀菌性（如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等），推荐提供样本浓度为50倍测试浓度，样本量为0.03 mL/种菌。

举例：测试材料的溶剂为DMSO，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本0.03 mL/种菌。

②若溶剂不具备杀菌性（如PBS、纯水、生理盐水等），推荐提供样本浓度为10倍测试浓度，样本量为0.1 mL/种菌。

举例：测试材料的溶剂为纯水，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本0.1 mL/种菌。

注：如果提供样本原液浓度高于推荐浓度，可按比例计算样本量。

如果样本为粉末，可按照浓度和所需体积计算样本量（＜10 mg者，需称量并标记清楚，避免样本量较少情况下再反复称量造成损耗）。

4.2粉末/液体类（样本颜色较重）-平板法

送样量：根据测试时样本工作浓度和浓度个数而定。比如工作浓度为X g/mL（或µM），测试n个浓度，样本量为60X*n g（或10X µM的液体样本6*n mL）

4.3液体类（样本属于分散液或制备成分散液，且呈无色或者淡色）-试管法

送样量：根据测试时样本工作浓度而定

①若分散剂具备杀菌性（如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等），推荐提供样本浓度为50倍测试浓度，样本量为2 mL/种菌。

举例：测试材料的分散剂为DMSO，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本2 mL/种菌。

②若分散剂不具备杀菌性（如PBS、纯水、生理盐水等），推荐提供样本浓度为10倍测试浓度，样本量为10 mL/种菌。

举例：测试材料的分散剂为纯水，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本10 mL/种菌。

4.5粉末类（直接加样）-试管法

送样量：根据测试时样本的工作浓度而定。比如工作浓度为X mg/mL（g/mL），则样品量为30X mg（g）/种菌。