血液肿瘤FISH检测判读建议(二): 基因断裂

血液肿瘤可能会出现某些基因断裂后易位重排，如嗜酸粒增多症可能出现PDGFRB、FGFR1等基因断裂，MDS（骨髓增生异常综合症）可能出现EVI基因断裂，AML（急性粒细胞白血病）可能出现RARA、CBFB、MLL、EVI等基因断裂，ALL（急性淋巴细胞白血病）可能出现ETV6、E2A、MYC、IGH、MLL等基因断裂，MM（多发性骨髓瘤）可能出现IGH、CCND1、CCND3、等基因断裂等等。这基因的断裂，FISH检测探针为断裂的两端（各几百kb）标记不同的颜色（红和绿）。

以MLL（又名KMT2A）基因断裂检测探针（用于MLL基因断裂的检测，含GSPMLL一个探针，断裂两端标记红绿两种颜色）为例。

MLL基因断裂检测探针（含对照，判读可类推其余断裂探针）

①探针设计：MLL断裂两端标记红绿两种颜色

②正常信号细胞：2F（融合）

典型异常（阳性）信号细胞：1红1绿1融合，可能出现n红m绿k融合（n和m≥1）的阳性信号情况

③阈值设定：随机选取10 例以上的正常骨髓细胞涂片或者正常外周血细胞涂片当阴性质控片，每张阴性质控片随机计数200 个细胞，分别计算出现各类型FISH 阳性细胞的数目及百分比，统计百分比的平均值及标准差，阴性阈值设定为平均值+3 倍标准差。

④计数判读：计数200 个细胞，出现2红2绿信号类型的细胞记为FISH 阴性细胞，出现可能出现n红m绿k融合（n和m≥1）信号类型的细胞记为FISH 阳性细胞

a) 若出现FISH 阳性细胞的比例大于阴性阈值时，判断为FISH 阳性；

b) 若出现FISH 阳性细胞的比例小于阴性阈值时，判断为FISH 阴性；

c) 若出现FISH 阳性细胞的比例等于阴性阈值时，应加大计数数目或分析整张片子（≥500个细胞），如果仍小于或等于阴性阈值，视为FISH 阴性；否则视为FISH 阳性。

⑤计数及判读注意：

a) 若无特殊情况，计数时只计数nOmGkF（n≥1，m≥1）的信号；

b) 若有特殊情况，某一特殊信号出现比例20%以上，最好查阅文献或相关材料验证，如IGH断裂可能出现1F1O（1融合1红）不典型异常的断裂阳性信号；

c) 红绿信号都出现的方可统计，若出现大比例（20%以上）没有红色或没有绿色或两者都无的情况，可能是样本或实验条件影响，最好用杂交信号很好的样本行对照再做。

⑥举例：计数时同一信号类型的细胞可用“正”计数表示（温馨提示：为提高效率，针对常见信号类型和阴性细胞可用计数器进行计数，而不常见或类型较少用正号记录）

计数情况：

信号类型

细胞个数

统计

2F

正正正正正正正正正正正

55

1O1G1F

正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正正

150

1O1F

一

1

结果：

1O1G1F阳性细胞比例=150/（55+150+1）=72.8%，大于阈值，MLL断裂阳性

此例样本为MLL基因断裂

⑦阈值参考：参考文献，断裂阈值10%。