拿什么拯救你，我的Western Blot条带：这六个“坑”请一定避开！

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作为生物学研究领域的必备实验技能

Western Blot（蛋白质印迹法）

在线折磨着一代又一代科研小白

每个经验丰富的实验老手

提起WB都能哭诉半宿

虽然是一个基础实验

但却是自然科学领域罕见的“玄学”操作

实验时间长、操作细节多

有时就算凑齐天时地利人和

也不一定能得到一组完美的条带

尽管WB实验这么玄

但有的坑还是有法子规避的

今天就跟大家分享下

WB实验中你一定要避开的六个“坑”

前

高

方

能

蛋白质的提取

提取蛋白质过程中，应在低温环境下进行，以抑制蛋白酶的水解作用（可加入适合的蛋白酶抑制剂）。

蛋白样品建议分装后冷冻干燥或直接以液体态置-80℃中保存，不要反复冻融。

蛋白浓度低时，可使用超滤膜浓缩或者用真空冻干机将蛋白冻干。

提高跑胶质量的Tips

小电压会使胶的分子筛效应得到充分发挥。电压越小，条带越漂亮，浓缩胶55V，分离胶75V就能跑得很好，但是实验的时间会很长。

胶的均匀度，胶越均匀，条带越窄，分离越均匀。倒胶之前，一定要充分混匀(不要有气泡)，玻璃板一定要干净，双蒸水隔离时，一定要比较轻地加上去，避免稀释上层的分离胶。

内参的选择

做全细胞和细胞质的WB实验时，选择β-actin基本能满足大部分的需要。而考察细胞核样品时，由于Histone H3是染色体的组成型表达组分，表达相当稳定，并且特别好跑，可以算是细胞核内参的首选。

针对一些特定的内参，蛋白上样量超过一定的量时，出来的条带可能不会有显著的差别。以前看过一篇文献讲的应该是β-actin，当上样量超过20 μg时，条带灰度不会呈线性的增加。因此，在做WB校正时，调节合适的上样量也是影响实验成功较大的一个因素。

电泳中常见现象的处理

条带呈笑脸状：凝胶不均匀冷却，中间冷却不好；电泳系统温度偏高，而且电场强度太大(电泳的电场大致呈现U形，所以因为赶时间而加大电压可能会出现这个)。应在低温环境下进行，以抑制蛋白酶的水解作用（可加入适合的蛋白酶抑制剂）。

条带呈皱眉状：可能是由于装置不合适，特别可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡，或者两边聚合不完全。

条带拖尾：样品溶解不好，或存在一定程度地蛋白降解。

纵向条纹（纹理条带）：样品中含有不溶性颗粒，可能抽提蛋白时出了问题。

条带两边扩散：加样量过多，弥散至孔周围了，减少上样量或者使用5X上样缓冲液。

实验做得好，图像处理也很重要！

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具体课程介绍详见后文或戳图片链接

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WB结果中背景较高

膜封闭不够，建议延长封闭的时间；选择合适的封闭液

一抗稀释度不适宜，太高，选择最适宜的抗体稀释度，或者是 一抗孵育的温度偏高，建议4℃过夜孵育。

膜的选择有问题：选择的膜容易产生高背景，一般NC膜的背景会比PVDF膜低，但是NC膜吸附力也就差了一点，膜在整个实验过程中干过或手套反复接触过，实验过程中要注意保持膜的湿润，使用镊子夹取膜。

检测时曝光时间过长，可减少曝光时间

WB结果信号弱或无信号

每个做WB的科研人的终极噩梦 —— 白板

图片来源：丁香园论坛上的网友

你所检测的样本中有不表达目的蛋白，选择表达量高的细胞作为阳性对照，用于确定检测样本是否为阴性，检测样本低表达目的蛋白，提高上样量，裂解液中注意加入蛋白酶抑制剂。

提取蛋白质过程中，应在低温环境下进行，以抑制蛋白酶的水解作用（可加入适合的蛋白酶转移不完全或过转移，可以用丽春红染膜并结合染胶(考马斯亮蓝)后确定条带是否转至膜上或转移过头；适当调整转膜的时间和电流。抑制剂）。

一抗孵育时间不足，建议4℃结合过夜，或者是由于二抗与一抗不匹配，选择针对一抗来源的种属的抗体。

洗膜过度，洗膜时间不宜过长，加入的去垢剂不宜过强或过多，建议使用0.1%的弱去垢剂Tween-20。

想获得一张漂亮的WB图并不容易

每个实验室也有自己的“专属秘方”

但除了在实验步骤上下功夫

符合规范且高效率的后期处理也很关键

避免踩坑

光靠理论恐怕远远不够

所以我们特意准备了实操教程

论文配图投稿的常识技巧

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电镜图伪彩上色处理的规范化操作

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图像处理+数据统计+作图排版

2020年9月12-13日

北京·中科院遗传与发育生物学研究所

2020年9月26-27日

南京·南京大学

2020年10月10-11日

深圳·南方科技大学

2020年10月24-25日

上海·复旦大学

作为国内领先的专业科研绘图企业，中科幻彩拥有百位硕博组成的设计师团队，深厚的科研背景+专业的设计水准=每年为超过1000个课题组制作超过3000幅论文配图作品+开课五年内举办超过500场科研绘图培训教授超过5000名学员。NSC金牌设计师，手把手教你如何从小白变大神！

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请联系17686831836（微信同号）

01

课程内容

Part1

实验图像处理与统计

第一章

科研配图及图像数据基础知识

剖析高档次科研文章中论文配图的重要性，理解制作出同等级的图片需要具备哪些能力，需要掌握哪些软件。

了解图像的概念，理解不同形式的数据表达，掌握版式、分辨率、格式（tiff/gif/jpg/png）、白平衡、灰度、色彩模式（RGB/CMYK/HSB/Lab）等基础知识。

学习数据图像、统计图表、绘制图形与排版的处理思路，在遇到不同需求时，比较各个软件的优势与用途。

第二章

投稿图像标准和图像处理规范

解读国际期刊对图片的相关要求，掌握各种期刊的投稿图片的偏好，学习如何提升配图的档次，使文章更容易脱颖而出。

理解高档次文章中图像的不同表现形式，学习不同类型的表现技巧。

学习科研图像处理的基本原理及规范；如何在让数据更有说服力的同时符合科学伦理原则，了解哪些是严格禁止的，让数据处理无后顾之忧。

第三章

图像数据定量分析方法

对高档次的文章中出现的图像数据进行剖析，学习如何对生物图像进行细胞计数、免疫荧光定量、药物分布图定量、荧光共定位、免疫组化阳性表达定量分析等操作技巧。

常见图像数据蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot图像的优化处理。学习掌握如何查看直方图、去背景、统计灰度值等操作。

利用ImageJ实现图像数据的长度、角度的测量、光照不均校正等处理方法。

学习软件：「ImageJ」

第四章

实验数据图像美化处理技巧

免疫组化拼接、组图或多图批量处理。

进化树的美化、给电镜照片上色、调节白平衡。

将多张图片匹配为一致颜色、将多张图片裁剪为同样大小、将多张图片裁剪同样部位、制作局部放大的图片、调整图片的分辨率、尺寸和对比度。

使用仿制图章工具、画笔工具等对图像进行修复，不同情况下的抠图方法。

学习图像调色方法，给图片添加标尺和箭头。

学习软件：「Photoshop」

第五章

Graphpad统计与制作数据图表

学习生物医学常用的统计基础，了解Graphpad的软件布局、统计思路及常用技巧。

学习T检验、方差分析等统计分析方法，针对不同情况选择合适的统计方式。

运用Graphpad制作不同类型的数据图表，如：XY图、柱状图、热图（基因分析或蛋白表达）、散点图、折线图、列联表、生存曲线图、饼图等。

结合高档次文献中的数据图表表达方式与展现技巧，将Graphpad图表矢量输出，在其他软件中打开并进一步美化。

学习软件：「Graphpad prism 8」

Part2

通路图/模式图/机理图的绘制

&

大量图像数据排版技巧

第六章

绘制矢量图的基础知识与技巧

矢量图形与位图的区别，哪些软件可以方便快捷的绘制科研图形。

多种图形的排布原则及常用技巧，如何突出重点的同时又做到整齐规范。

色彩构成，学习色彩的色相、明度、饱和度的具体含义，不同颜色对图像的影响。

多种颜色搭配的基础原则，如何在一张插图中运用好多种颜色。了解色环及配色的常用技法。

第七章

Ai绘制通路图/模式图/机理图

认识Adobe illustrator软件，界面布局及数据存储方式，学习矢量软件中的图形构成，不同功能对应的窗口及常用命令。掌握Adobe illustrator的基础操作。

学习不同类型的箭头快速绘制，将不同图形进行排布与连接，绘制完整的信号通路图、抗原抗体作用模式图、免疫细胞方面作用机理图等。

运用Adobe illustrator绘制常用科研配图基本形状：基因、细胞、蛋白质（受体配体）、肿瘤、病毒、实验仪器、小老鼠、针头等。将Ai软件活学活用，从不同案例中总结绘制规律，用最快速最简便的方法得到所需科研图形。

学习软件：「Adobe illustrator」

第八章

大量图像/图表数据的排版技巧

剖析高档期刊已发表文章中图像、图表类型数据组图的排版规则，不同案例对比，分析不同情况下的排版思路。

学习如何将大量图像数据轻松排列，修改单独图像尺寸与间距。

图像类数据的排版案例实战。如：照片、免疫荧光图、病理图、流式图、条带图等。

统计图表类数据的排版案例实战。如：XY图、柱状图、热图、散点图、折线图、列联表、生存曲线图、饼图等。

论文配图中的绘制图形、数据图像、统计图表等多种类型元素的组合排布，制作完整论文插图的实战演练。

学习软件：「Ai/Photoshop综合运用」

02

讲师团队

中科幻彩拥有一支专业且经验丰富的讲师团队，包括中科幻彩设计总监、金牌设计师在内的主讲老师毕业于北京大学、中科院化学所等国内著名高校，拥有生命科学/药剂学/生物化学/农学等专业博士学位，师从中国科学院院士，发表Molecular Cell /Developmental Cell /Biomaterials等SCI论文数篇，拥有深厚的科研背景，并受邀参与Cell Science Nature杂志中国主编圆桌对话会议，十年设计工作经验，制作顶刊封面作品三千余幅，曾为多家顶级医院制作科普动画，三维动画作品多次登上Science和央视，累计服务过三十余位院士课题组和上千家合作单位。

团队主编了国内首本月销量过万的科研绘图工具书《科研论文配图设计与制作从入门到精通》，目前已拥有五百余场线下绘图培训的教学经验，通俗精炼的授课风格和实践性突出的技能强化，每场培训的好评率均在99%以上，让近5000名零基础学员从小白入门科研绘图，并培养了一批水平高超的科研绘图设计师。

03

培训目标

图像数据处理更准确、更高效

全面提升文章配图的审美层次

掌握部分高级图像的设计排版能力

熟练使用国际通用的论文配图制作软件ImageJ进行实验图像数据处理、Graphpad进行统计与制作图表、Photoshop进行图像美化、Ai进行作图与排版等；

掌握制作符合国际规范的、可投稿至世界任何国际期刊高质量论文配图的基本能力；

熟悉相关领域所投期刊的要求与偏好，学会利用高质量配图博得审稿人的认可，做到“投其所好”；

掌握图像数据定量分析的方法和技巧，轻松处理Western Blot、免疫荧光和免疫组化等图像数据；

掌握SCI论文配图的美化技巧，巧妙运用排版、构图、箭头、线条、文字、配色以及形象化的表现手法实现文章配图的“升级”；

事半功倍轻松应对学术会议展示、毕业答辩、成果汇报、项目申请书撰写、著作编纂等项目中的图片处理工作。

04

案例展示

实验图像处理与统计

通路图/模式图/机理图的绘制

大量图像数据的排版技巧

05

课程福利

报名后可无限次参加本课程全国其他任意场次，并随课赠送必备软件下载安装和常用绘图素材包，课后学员交流群专业讲师随时答疑指导。

「全国27个主要城市每年超70场次无限次复听」

ImageJ

Graphpad

Adobe illustrator

Photoshop

「必备软件及素材包下载安装」

「课后学员交流群讲师随时答疑指导」

06

课程特色

一线科研人员最实用最高效的经验总结，数十名来自国内知名高校以及中科院的科研人员参与课程开发，有着丰富的实验和投稿经验，直击学员最刚需的“要害”技能；

邀请Cell等知名期刊国内审稿人作为课程顾问，从审稿人的角度对课程内容进行相关技巧的优化，真正帮助学员做到“知己知彼”；

将生物、医学、药剂学、农学等领域中典型模型作为实战案例，同时根据每场次学员的专业背景进行素材整理，量身定制课程内容，将学以致用发挥到极致；

在传授实用技巧的同时，注重培养学员掌握图像数据处理过程中的思路，实现“技巧+思路”的双剑合璧，在实践中真正做到举一反三，不局限于有限的案例；

精英小班制教学，每场限额30人，“主讲+助教”的现场教学模式，照顾到每一位学员的实际操作，并建立专属学员微信群，课前专业助教协助安装软件下载素材包，课后讲师长期群内随时答疑，不定期推送绘图技能提升小视频，帮助学员轻松应对科研绘图中的常见难题；

我们承诺：学员一次报名，终身免费复学。无需担忧学不会、学不精，只要你愿意学，幻彩保证奉陪到底！

07

培训现场

08

报名方式

时间地点

2020年9月12-13日

北京·中科院遗传与发育生物学研究所

2020年9月26-27日

南京·南京大学

2020年10月10-11日

深圳·南方科技大学

2020年10月24-25日

上海·复旦大学

具体会议地点以邮件通知为准

（更多场次请扫描下方二维码，表单中的场次实时更新）

扫描二维码在线填写报名表，工作人员会在收到报名信息的第一时间电话联系确认相关信息。表单报名如出现异常，请联系助教17686831836（微信同号）

注册费用

原价：2996元/人

团报价：2796元/人（3人及以上）

报名咨询：17686831836（微信同号）

备注：

如有专场培训需求，可安排讲师赴贵单位开展专场培训，专场培训价格更优，详询请加课程助理微信：wuruixue2910

提供正规发票（包括会议注册表、邀请函等报销材料）、费用包含两日午餐，住宿及其他费用自理。

报名后将会有工作人员联系学员确认相关信息，具体会议地点以邮件通知为准。工作人员将于开课前上周的周三向学员邮箱发送实际上课地址、课程所需软件和下载安装教程，请各位学员届时注意查收邮件。

老学员复听不再重复安排午餐和资料，请提前联系课程助理（微信：17611790910）报名，并携带身份证现场签到。

缴费方式

银行转账汇款（由济南分公司收款）

收款单位：北京中科幻彩动漫科技有限公司济南分公司

银行账号：15126701040003321

开户行：中国农业银行股份有限公司济南茶城支行

备注：姓名+单位+场次

支付宝转账

企业支付宝账户：[email protected]

请核对户名：北京中科幻彩动漫科技有限公司济南分公司

备注：姓名+单位+场次

现场刷卡/现金

培训当天可刷公务卡或现金或微信支付，请扫码填写报名信息以便我们提前为您准备发票等报销手续。

由于名额有限，为保证您报名成功，现场报名或开课前对公转账未能到账的学员，请在报名时支付宝支付订金1000元，全款到账后当天退还订金。

专场需求

//专场简介

自2015年起，中科幻彩先后在清华大学、北京大学、吉林大学、厦门大学、四川大学、华中科技大学、暨南大学等数十家单位开展专场培训，为相关单位的科研人员提供定制化的绘图技能培训服务，在提升科研绘图水平的同时，也丰富了学生课余生活，增加专业技能，帮助学生们从零基础入门到轻松玩转ImageJ/Graphpad/Ps/Ai等常用绘图软件，帮助科研工作者掌握绘制论文配图的技巧，注重实用性和技巧性。

//专场内容

专场培训的内容将根据举办方提出的图像需求，我方单独制定适合本单位研究方向、贴合日常绘图需求的课程内容，根据学员要求进行备课，案例素材契合度更高，大幅提升学习效率。

//专场优势

根据研究方向定制课程内容，针对性强；

专场培训费用更加优惠；

建立专门微信交流群，课前征询需求，课后随时答疑；

上门授课，免去差旅的麻烦。

//课程咨询

专场培训课程详情咨询请联系

TEL：18560061984（微信同号）

QQ：3010463275

09

常见问题

学员

我是零基础学员，两天的时间也能学会吗？

为了提高学员的学习效率、节省差旅时间，我们的课程安排是两天时间，但是早中晚都会安排课程内容，总教学时长与三天培训相当哈；我们的课程全程手把手教学，保证零基础学员也能跟得上、学得会，让现场学习节奏循序渐进，确保每位学员都能够充分吸收课程精华，我们大部分学员都是零基础的，通过学习后能够基本掌握独立处理实验图像数据与统计，绘制和排版文章插图和普通封面的水平，并且我们的课程是报名一次无限次复听，学员可以随时参加其他场次～

中科幻彩

学员

请问学习的软件有mac版本吗？

培训中涉及到的每款软件都有mac版本可以下载使用，完全适用于苹果笔记本电脑~

中科幻彩

学员

每场培训有多少学员呀？不会是那种人山人海的大课吧？

为保证教学质量，也为学员营造舒适的学习环境，我们每场培训都会将招生人数限制在30人以内，以保证良好的课堂秩序，同时安排助教协助学员进行软件安装、现场答疑、课堂辅助教学等。

中科幻彩

学员

我是慢热型的学生，接受新知识慢，一次学不够怎么办？

我们每个月都会在全国不同城市安排多场次培训，老学员可以免费复听，一次报名终身免费复学，只要你学不够，我们就一直教下去。

中科幻彩

学员

可以开具发票进行报销吗？

当然可以！我们将为学员开具正规发票，并可以根据学员报销需求提供培训邀请函、项目明细清单、会议注册表等材料，并在培训当天将发票和报销材料发放给学员。

中科幻彩

学员

培训提供食宿吗？

我们为学员提供两日培训的午餐，住宿需要学员自费，我们会在报名确认邮件中发送周边酒店信息，方便学员选择和预定。

中科幻彩

科学动画制作

千言万语不敌动画十秒，文字描述在动画演示面前显得笨拙无比，越来越多的顶刊开始引入视频摘要（Video Abstract）的表达形式，生动的科学视频让科研成果的表达不再晦涩难懂，也让更多学术圈外的普通人能够触及科学最前沿的内核，为科学成果的传播提供更加有力的途径。

在这个连美国总统都玩转Twitter的新媒体时代，如果你还局限于文字+图片这种单纯保守的科研表达形式，那你很可能就要被同行所抛弃了，因为科学成果的表达有更高效更直接的载体——科学动画。

以上动画制作来自

如今，刷朋友圈已经不再仅仅属于年轻人了，社交媒体也已经成为科学家分享想法和宣传研究的平台，在这个快节奏的时代，像视频动画这种阅读起来简单快速而且有价值的信息更受追捧，冗长而乏味的文章形式已经逐渐被冷落。因为现在的大佬，已经不局限于只是发论文、做封面，他们在悄悄地占据科研表达的新领地——动画。

中国科学院物理研究所高鸿钧院士

经过多年研究攻关，中国科学院院士、中科院物理研究所研究员高鸿钧团队在世界上首次实现了原子级精准控制的石墨烯折叠，其成果发表在了国际顶级杂志Science上，这是目前世界上最小尺寸的石墨烯折叠，对构筑量子材料和量子器件等具有重要意义。

北京航空航天大学张广军院士

列车弓网运行状况在线动态检测系统-北京航空航天大学张广军院士团队研制了列车运行状况正线动态测试站三类系列测试设备，填补国内空白，主要性能指标达到或超过国外主流产品，满足了我国铁路运输的迫切需求。

北京纳米能源与系统研究所王中林院士

北京纳米能源与系统研究所王中林院士和李舟研究员领导的研究团队与北京市生物医学工程高精尖创新中心和海军军医大学的研究者联合研制了共生型心脏起搏器（SPM, symbiotic cardiac pacemaker），它可以从心脏跳动中获取能量，为起搏器自身提供电能。SPM的能量收集部分为植入式摩擦电纳米发电机（iTENG），其具有出色的柔性、良好的生物相容性、优异的稳定性和生物体内高功率输出性能等特点。在未来，植入式医疗电子设备可以利用人体能量实现自驱动。

中国科学院化学研究所刘云圻院士

作为材料学领域的后起之秀，石墨烯被认为是电子器件理想的候选材料，在近期发布的2020十大科学趋势预测当中，石墨烯有望成为碳电子学的主体材料。作为中国石墨烯研究领域的权威学者，中国科学院院士刘云圻利用化学气相沉积法合成氮掺杂石墨烯并对其电学性质进行了研究，发现氮掺杂可以有效地影响石墨烯的电学性质，极大地推动了石墨烯的研究与应用。

中国科学院微电子研究所刘明院士

中国科学院微电子研究所刘明院士团队从能带工程出发，引入新材料/结构，综合优化CTM隧穿层/俘获层/阻挡层，实现低压、高速、长数据保持和多值存储。在实验室工作的基础上，2008年开始与产业界合作研发纳米晶闪存，在生产平台上首次完成纳米晶存储器系统研究；获得自主产权纳米晶存储技术整体解决方案，解决了纳米晶存储材料分布均匀、存储器物理模型仿真、集成工艺、可靠性及芯片集成等技术难题。

中国科学院物理研究所柳延辉研究员

中国科学院物理研究所柳延辉研究组与合作者基于材料基因工程理念开发了具有高效性、无损性、易推广等特点的高通量实验方法，设计了一种Ir-Ni-Ta-(B)合金体系，获得了高温块体金属玻璃，其玻璃转变温度高达1162 K。新研制的金属玻璃在高温下具有极高强度，1000 K时的强度高达3.7千兆帕，远远超出此前报道的块体金属玻璃和传统的高温合金。

以上动画制作来自

也许你还不知道，很多大牛可能已经开始在朋友圈分享自己最新科研成果的动画展示了。有越来越多的科学家，已经开始利用动画这一利器，扩大自己的科研影响力。

以上动画制作来自

为毕导视频《新冠疫苗的最完全解释》

制作原理动画

点击量超百万

完整视频请登录网址观看

https://space.bilibili.com/487058367/dynamic

社交媒体也已成为科学家分享想法和宣传研究的平台

在这个快节奏的时代

视频动画注定将取代文章图片

成为新时代科研圈备受追捧的宠儿

以上动画制作来自

科学动画的用途

近年来，科学动画已经逐渐成为大项目申请、大文章发表、大装置媒体报道和大产品发布的必备展示方式，科学动画，成功科学家的标配；科学动画，助力科学家的成功。

论文补充视频，电视台采访视频，学校网站新闻视频；

大项目申请与答辩，重要学术会议报告；

院士杰青等人才项目申请；

大科学装置展示/物理原理展示/药物机理展示；

科研产品宣传片等。

怎样迅速提高影响力？

与其等待别人到杂志官网去浏览

不如直接让科研成果的动画演示登上央视

依仗媒体的传播力

搭配动画特效

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