SDS | 您所在的位置:网站首页 › tris-glycine缓冲液配方 › SDS |
1.5 mol/L Tris (PH8.8) 1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。 2.加入约800 ml去离子水,充分搅拌溶解。 3.用浓盐酸调节pH值至8.8。 4.定容至1L. 5.高压灭菌后,室温保存。 注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1oC,溶液的pH值大约降低0.03个单位。 (参照kara公司Catalog-N1) 1 mol/L Tris (PH6.8) 1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2.加入约800 ml去离子水,充分搅拌溶解。 3.按下表量加入浓盐酸调节所需的pH值。 pH值 浓HCl 6.8 7.4 约70 ml 7.6 约60 ml 8.0 约42 ml 4.定容至1L. 5.高压灭菌后,室温保存。 注意:1.溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1oC,溶液的pH值大约降低0.03个单位。2. 如1 mol/L溶液呈现黄色,应予丢弃,并置备质量更好的Tris。 (参照kara公司Catalog-N1) 30%丙稀酰胺(100ml) 1.称量下列试剂置于烧杯中。 丙烯酰胺(Acrylamide) 29 g 双丙烯酰胺 (BIS) 1 g 2.加入约60 ml去离子水,充分搅拌溶解。 3.定容至100 ml,用0.45 µm滤膜滤去杂质。 5.于棕色瓶中4 oC保存。 注意:1. 丙烯酰胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成分。 (参照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924) 30%SDS 1.称量10 g高纯度(电泳级)的SDS置于100~200 ml烧杯中。 2.加入约800 ml去离子水,68oC加热溶解。 3.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。 4.定容至100 ml,室温保存。 (参照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924) 10%过硫酸铵 1.称量1 g过硫酸铵。 2.加入约10 ml去离子水后搅拌溶解。 3.储存于4oC。 注意:10%过硫酸铵溶液在4oC保存时可使用两周左右,超过期限会失去催化作用。 (参照Takara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924) 1×SDS凝胶加样缓冲液 50 mmol/L Tris·Cl (pH 6.8) 100 mmol/L DTT 2% SDS (电泳级) 0.1% 溴酚蓝 10% 甘油 不含DTT的1×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温,临用前必须从1 mol/L DTT储存液中现用现加于上述缓冲液中。 (参照《分子克隆》二版P884) 本人将参照此配方,配成5×或6×,各成分浓度均扩大5倍。 另:Takara公司Catalog-N5上的5×SDS-PAGE Loading Buffer配方: 组分浓度: 250 mmol/L Tris·Cl (pH 6.8) 10% (W/V) SDS (电泳级) 0.5% (W/V) 溴酚蓝(BPB) 50% (V/V) 甘油 5% (W/V) β-巯基乙醇(2-ME) 配制量5 ml 配制方法 1.称量下列试剂置于10ml塑料离心管中。 1 M Tris·Cl (pH 6.8) 1.25 ml SDS (电泳级) 0.5 g 溴酚蓝(BPB) 25 mg 甘油 2.5 ml 2.加去离子水溶解后定容至5 ml。 3.小份(500 ul/份)分装后于室温保存。 4.使用前将25 ul的2-ME加到每小份中。 5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。 1 mol/L DTT(20 ml) 1.称取3.09 gDTT,加入到50 ml塑料离心管中。 2.加20 ml的0.01 M NaOAc (pH5.2),溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。水配 3.分装后-20oC保存。 (参照《分子克隆》二版P884) 3 M醋酸钠(NaOAc)(100 ml) 1.称取40.8 gNaOAc·3H2O置于100~200ml烧杯中,加入约40ml的去离子水后搅拌溶解。 2.加冰醋酸调节pH值至5.2。 3.定容至100 ml,高压灭菌后室温保存。 (参照《分子克隆》二版P884) 0.01 MNaOAc (pH5.2) 参照此配方配制。 5×Tris-Glycine Buffer(SDS-PAGE电泳缓冲液) 组分浓度:0.125 M Tris, 1.25 M Glycine, 0.5%(W/V) SDS 1.称量下列试剂置于烧杯中。 Tris 15.1 g Glycine 94 g 10%(W/V) SDS(电泳级) 50 ml 或5g SDS 2.加入约900 ml去离子水搅拌溶解。 3.定容至1L,室温保存。 (参照《分子克隆》二版P884) Transfer Buffer: [自配]Transfer Buffer:500ml 25mMTris base, 0.2M glycine(甘氨酸), 20% methanol(甲醇PH8.5) 先配制1M Tris base (MW:121.1) 100ml: 12.1g Tris base + ddH2O至100ml,调PH8.5(1L约加22ml浓盐酸) 1M12.5ml Tris base + 7.5g glycine(MW:75.05) +100ml methanol + ddH2O 至400ml,调好PH值,再加ddH2O至500ml. 先置于4oC保存备用。 (参照吴兴军给Protoco,据说优于《分子克隆》配方) 丽春红S储存液(10×) 丽春红S 2 g 三氯乙酸 30 g 磺基水杨酸 30 g 加水至100 ml。 用1份上述储存液加9份去离子水即成丽春红S使用液,使用后应予废弃。 10X TBS (Tris-buffered saline): To prepare 1 liter of 10X TBS:24.2 g Tris base, 80 g NaCl; adjust pH to 7.6 with HCl (use at 1X). (参照Cell signal Technology Protoco) Wash Buffer TBS/T:(0.05%吐温)可用PBST代替 1X TBS, 0.1% Tween-20 [自配] Wash Buffer TBS/T:1000ml 1×TBS,0.1%Tween-20,100ml 10×TBS+ 1ml Tween-20+ 900ml ddH2O (参照Cell signal Technology Protoco) Blocking Buffer:(3%BSA的TBST或PBST)封闭 1X TBS, 0.1% Tween-20 with 5% w/v nonfat dry milk。 [自配]Blocking buffer:150ml for 150ml, add 15ml 10×TBS to 135 ml water,mix.Add7.5g nonfat milk and mix well.While strirring,add 0.15ml Tween-20(100%). (现用现配,4oC储存备用) (参照Cell signal Technology Protoco) Primary Antibody Dilution Buffer:抗体稀释(1%BSA TBST或PBST,不加BSA也可) 1X TBS, 0.1% Tween-20 with 5% blocking agent; for 20 ml, add 2 ml 10X TBS to 18 ml water, mix. Add1.0 g BSA and mix well. While stirring, add 20 µl Tween-20 (100%). (参照Cell signal Technology Protoco) 显色液(好用) 5mg DAB;200ul 1M Tris(PH=8.5,常用作纯化液母液);9.5ml水,静置5min(加入Tris缓冲液会变浑浊),加入3.5ul 双氧水,现用现配,可配好无双氧水的10X母液分装,-20℃保存,1ml/支,用时稀释到10ml并加入3.5ul双氧水即可使用。 本实验室SDS-PAGE电泳凝胶配方如下: 本文使用 文章同步助手 同步 |
CopyRight 2018-2019 实验室设备网 版权所有 |