WB二抗怎么选择

二抗分为完整抗体形式和抗体片段形式。使用完整抗体还是抗体片段通常取决于所进行的应用。例如，抗体片段对于免疫组织化学和免疫荧光是最佳选择，因为它们的分子量较小并易于穿透组织。在其它大多数应用中，完整抗体是最常用的二抗类型。

完整的抗体包括重链和轻链，通过可变区提供二价结合能力，同时具有可偶联产生信号的染料或酶标记物的的恒定区。但是，完整抗体可能会导致高背景和低特异性，因为所有免疫球蛋白的轻链区是相同的，从而增加了交叉反应性。

F(ab’)2片段是通过对完整抗体使用胃蛋白酶进行酶解后获得的。这种抗体片段包含带有两个抗原结合位点的可变区，但缺少抗体的Fc片段。因此，F(ab’)2片段对于可能含有Fc受体的样本而言是应当优先选择的二抗类型。同时它们比完整抗体要小，因此穿透某些样本的效果更好。但是，分子较小也意味着可以同F(ab’)2片段偶联的染料和酶也更少，从而使得这类二抗的灵敏度不及完整抗体形式的二抗。Fab’片段是通过对完整抗体使用木瓜蛋白酶进行酶解后获得的。这类抗体片段包含一个单独的结合结构域，同时带有一小部分恒定区。Fab’片段可以用于不适合使用二价抗体的一些特定应用。

图3. 抗体片段的名称和结构。

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