基于 CRISPR 的基因组编辑技术入门

作为一种包括Cas9核酸内切酶和非编码的导向RNA（gRNA）的简单双组分体系，经过基因改造的II型CRISPR/Cas体系可用于在预先设定靶向的目标序列处切割基因组DNA。gRNA由两种分子组分：一种靶向互补的CRISPR RNA（crRNA）和一种辅助的反式激活crRNA（tracrRNA）。gRNA和PAM (NGG)基序引导Cas9核酸酶至基因组特定位置，形成复合物，之后局部链分离(R-loop)，Cas9核酸酶在PAM 位点上游3个碱基的位置形成一种双链DNA断裂（DSB）。因此，您既可以通过突变赋予靶标基因新的功能，实现敲除效果，也可以引入外来或合成的基因组序列，研究新的应用。

CRISPR也可灵活用于非编辑应用，例如基因调控或者RNAi相关的研究。Cas9核酸酶可以连接到不同的功能域（激活子或者抑制子）上，或者也可以设计gRNA用于直接切割miRNA。