临床样本采集指南丨（二）组织样本篇

前言

各研究课题的采样条件和研究目的具有较大区别，该样本采集方法仅适用于常见临床蛋白质组学实验方案，请在准备样本前联系我司销售，我司技术人员将会根据您的具体实验条件和研究目的为您制定专属的采集方法。

样本采集基本原则

1、代表性和准确性原则

样本的采集部位和类型应充分考虑在研课题的研究价值和应用价值。样本应按实验设计要求及时、准确分离待检测部位或成分，再进行冻存和送检。例如：研究血浆样本应不包含血细胞成分；研究肿瘤组织应不包含正常组织、血液等。样本应保持采集时原始状态，不在采集方法要求外添加其他试剂。使用手术剪刀、聚丙烯离心管等洁净的工具和耗材，避免人为引入的非生物类和生物类污染。

2、一致性和可追溯性原则

在多中心和长周期项目中，使用统一的样本采集和保存方法格外重要，应在项目开展过程中组织多次的样本采集培训，以保证所有样本在取材部位、采集时机、处理过程等方面保持一致，减少样本在采集环节引入的差异。样本应具有统一的标记规则、规范的保存记录、详尽的临床信息。

3、迅速性和低温性原则

样本在离体后应及时进行处理和低温保存；样本应根据研究需求在采集阶段进行分装，以避免在后续制备过程中反复冻融；样本在不符合采集规定的温度下避免长时间存放，以减少样本中蛋白质在活性蛋白酶、自然降解、环境微生物等因素影响下发生的变化。

4、生物安全性和信息安全性原则

样本采集、保存、转运、使用等过程应符合《中华人民共和国生物安全法》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《中华人民共和国人类遗传资源管理条例》等相关法制要求；涉及样本采集、转运、检测等过程的合作单位应依法享有知情权和防护权；应参照《人间传染的病原微生物名录》实验活动所需生物安全实验室级别及运输包装分类进行无感染性处理和运输；本公司仅接收在BSL-1级别实验室操作的实验材料。

样本采集参考方法——组织样本

新鲜/冻存组织

样本要求

1. 样本已经剥离附着的其他组织，仅包含待研究部分。

2. 样本经过生理盐水清洗，不含明显浮血。

3.样本包含100 mg及以上新鲜/冻存组织块，未经其他用途使用。

4.样本采集符合代表性和准确性原则、一致性和可追溯性原则、迅速性和低温性原则、生物安全性和信息安全性原则等四条基本原则。

参考方法

1. 手术切取研究组织，剥离样本上附着的其他组织，仅保留实验待研究部分；

2. 用生理盐水冲洗组织至没有明显血液流出；

3.使用干净纱布吸干样本多余水分，称重后100 mg每管分装组织；

4.将样本迅速冻入-20 ℃冰箱短期保存，或-80 ℃冰箱长期保存，检测时取一份样本干冰寄送。

参考文献

1. Deep Proteome Profiling Reveals Common Prevalence of MZB1-Positive Plasma B Cells in Human Lung and Skin Fibrosis. Am J Respir Crit Care Med. 2017 Nov 15;196(10):1298-1310.

2. Pathological features of COVID-19-associated lung injury: a preliminary proteomics report based on clinical samples. Signal Transduct Target Ther. 2020 Oct 15;5(1):240.

石蜡切片

样本要求

1. 样本切成厚10 μm，长宽分别≥5 mm的切片。

2. 样本包含10片及以上，未经过染色等其他用途使用。

3.样本采集符合代表性和准确性原则、一致性和可追溯性原则、迅速性和低温性原则、生物安全性和信息安全性原则等四条基本原则。

参考方法

1. 用切片机将石蜡包埋样本切割成厚度10 μm的薄片，共切割10片，放入同一个进口1.5 mL离心管中（注意：一般来讲，若无特殊要求，尽量选取横断面最大处进行切割，保证横断面长、宽分别≥5 mm；在处理不同石蜡包埋样本时，尽量保持相同位置的横断面进行切割，从而最大限度保证实验的一致性）；

2. 在离心管顶部和侧面分别做上标记，并用封口膜将离心管盖包裹密封；

3.4 ℃保存，使用冰袋寄送样本。

参考文献

1. Proteomic analysis of archival breast cancer clinical specimens identifies biological subtypes with distinct survival outcomes. Nat Commun. 2022 Feb 16;13(1):896.

2.STAT3-dependent analysis reveals PDK4 as independent predictor of recurrence in prostate cancer. Mol Syst Biol. 2020 Apr;16(4):e9247.

血栓

样本要求

1. 样本已经剥离附着的其他组织，仅包含待研究部分。

2. 样本采集符合代表性和准确性原则、一致性和可追溯性原则、迅速性和低温性原则、生物安全性和信息安全性原则等四条基本原则。

参考方法

1. 手术采集血栓，剥离样本上附着的其他组织，仅保留实验待研究部分；

2. 使用生理盐水轻轻冲洗血栓，用干净纱布吸取样本多余水分；

3.将样本迅速冻入-20 ℃冰箱短期保存，或-80 ℃冰箱长期保存，检测时干冰寄送。

参考文献

1. Proteomic characterization of human coronary thrombus in patients with ST-segment elevation acute myocardial infarction. J Proteomics. 2014 Sep 23;109:368-81.

2. Proteomic analysis reveals distinctive protein expression patterns of thrombus in clear cell renal cell carcinoma. Transl Oncol. 2021 Jan;14(1):100895.

毛发

样本要求

1. 样本表面洁净，不含尘土、油脂、污渍等污染。

2. 样本采集符合代表性和准确性原则、一致性和可追溯性原则、迅速性和低温性原则、生物安全性和信息安全性原则等四条基本原则。

参考方法

1. 将毛发剪成1-3 cm小段，加入适量生理盐水浸洗5-10分钟；

2.  使用干净纱布按压吸收掉毛发上附着的水分；

3.将样本迅速冻入-20 ℃冰箱短期保存，或-80 ℃冰箱长期保存，检测时干冰寄送。

参考文献

1. The detection of sedatives in hair and nail samples using tandem LC-MS-MS. Forensic Sci Int. 2007 Feb 14;166(1):58-67.

2. Determination of opiates and cocaine in hair as trimethylsilyl derivatives using gas chromatography-tandem mass spectrometry. J Anal Toxicol. 1999 Sep;23(5):343-8.

指甲

样本要求

1. 样本表面洁净，不含尘土、油脂、污渍等污染。

2. 样本采集符合代表性和准确性原则、一致性和可追溯性原则、迅速性和低温性原则、生物安全性和信息安全性原则等四条基本原则。

参考方法

1. 将指甲剪成约1-2 mm碎片，加入适量生理盐水浸洗5-10分钟；

2. 使用干净纱布按压吸收掉毛发上附着的水分；

3.将样本迅速冻入-20 ℃冰箱短期保存，或-80 ℃冰箱长期保存，检测时干冰寄送。

参考文献

1. The detection of sedatives in hair and nail samples using tandem LC-MS-MS. Forensic Sci Int. 2007 Feb 14;166(1):58-67.