细胞培养的常见难题

2023-05-30 20:53| 来源: 网络整理| 查看: 265

原标题：细胞培养的常见难题

最近收到了很多大家反馈的细胞培养问题，今天结合多年实践经验和细胞培养指南，为大家讲述细胞从复苏、传代到冻存等一系列过程及常遇到的难题和小细节。

◆如何查找细胞培养条件和细胞的来源等信息？

不同细胞的培养基是不同的。ATCC等官方数据库针对不同细胞株，会有详细介绍，包括：培养基的类型、培养条件、细胞来源、生长的状态图等。可以在购买细胞前查找相关信息，挑选符合实验研究的细胞系，做好充分准备。

◆ 大多数细胞系可以在不止一种培养基中生长，那可以替换吗?

不建议突然更换培养基，当培养条件改变时，细胞形态状态会发生很大的变化，如果一定要更换培养基，可以做平行测试再决定是否可以更换。

◆ 培养基为什么一般都是偏红色?

因为培养基加了酚红作指示剂，指示pH范围为6~8，培养基偏酸则发黄，偏碱则发紫，需要及时换液，更换新鲜的培养基，以维持细胞良好的生长环境。一些特殊的细胞需要用无酚红的培养基，需要及时观察细胞。

◆ 为什么细胞复苏后，很多难以贴壁?

可能是细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡。切记融化速度要快，也要离心去掉DMSO。若未贴壁的细胞依然存活，可以离心收集重新接种回原瓶中，并调整血清比例至15%辅助贴壁培养。

◆ 为什么传代或复苏后细胞贴壁了，却长不起来?

可能是细胞密度的问题，一些细胞倾向于维持一定的密度生长，若细胞生长缓慢，可将细胞转移到较小的培养瓶/皿中培养或提高血清比例培养。

◆ 有必要每天观察细胞吗? 一般的肿瘤细胞我们是隔天传代，但是切不可忽略对细胞的观察，每天都要观察：肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况等。有一些细胞完全摊开需要一定的时间，在未贴壁前减少挪动观察，有助于贴壁。 ◆ 几天换培养基? 正常情况下，培养液偏红色。如果细胞维持在pH6.5～6.6条件下，培养基变黄，说明培养液中代谢产物已堆积到一定量，细胞会脱落死亡，需要更换新鲜培养液。一般细胞生长旺盛时1～2天换一次，生长缓慢时，3～4天亦可。

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