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原料检验操作规程

题目：槟榔原药料检验操作规程 编号：TS-GC-YL-20880-02 制定人： 制定日期：2020年 月 日 版本：2 页数：1/3 审核人： 审核日期：2020年 月 日 颁发部门：质 量 部 批准人： 批准日期：2020年 月 日 生效日期：2020年 月 日 目的：规范槟榔原药料检验操作 范围：槟榔原药料检验 分发部门： 质量部、化验室、生产部 标 题 正 文 1 2 2.1 2.1.1 3 3.1 3.1.1 3.1.2 3.2 3.2.1 3.2.2 4 4.1 4.1.1 4.1.2

标准依据：《中国药典》2020年版一部及四部 【性状】 仪器：直尺。 方法：取本品,置日光下观察,并用直尺测量：本品呈扁球形或圆锥形，高1.5～3.5cm，底部 直径1.5～3cm。表面淡黄棕色或淡红棕色，具稍凹下的网状沟纹，底部中心有圆形凹陷的珠孔，其旁有1明显瘢痕状种脐。质坚硬，不易破碎，断面可见棕色种皮与白色胚乳相间的大理石样花纹。气微，味涩、微苦。 【鉴别】 （1）显微鉴别 仪器与试剂：显微镜、酒精灯、水合氯醛等。 方法：取本品，用水合氯醛装片，至显微镜下观察：本品横切面：种皮组织分内、外层，外层为数列切向延长的扁平石细胞，内含红棕色物，石细胞形状、大小不一，常有细胞间隙；内层为数列薄壁细胞，含棕红色物，并散有少数维管束。外胚乳较狭窄，种皮内层与外胚乳常插入内胚乳中，形成错入组织；内胚乳细胞白色，多角形，壁厚，纹孔大，含油滴和糊粉粒。 （2）薄层鉴别 仪器与试剂：分析天平、乙醚、碳酸钠、碳酸氢钠、甲醇、硅胶G 薄层板、环己烷、乙酸乙酯、槟榔对照药材、氢溴酸槟榔碱对照品等。 方法：取本品粉末1g，加乙醚50ml，再加碳酸盐缓冲液（取碳酸钠1.91g和碳酸氢钠0.56g，加水使溶解成100ml，即得）5ml，放置30分钟，时时振摇，加热回流30分钟，分取乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，置具塞离心管中，静置1小时，离心，取上清液作为供试品溶液。另取槟榔对照药材 1g，同法制成对照药材溶液。再取氢溴酸槟榔碱对照品，加甲醇制成每1ml含1.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-浓氨试液（7.5:7.5:0.2）为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点。 【检查】 水分 不得过10.0%(通则0832第二法）。 仪器：扁形称量瓶、分析天平、粉碎机、药筛、数显电热恒温干燥箱等。 方法：取供试品2?5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm, 精密称定，开启瓶盖在100?105°C第 1 页 共 4 页

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4.1.3 干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（％)。 计算公式： W样+W0－W1 样品含水量% = ×100% W样 式中： W0 ---------------------------- 称量瓶的重量（g）。 W1 --------------------------- 样品烘后与称量瓶的重量（g）。 W样 --------------------------- 样品的重量（g）。 黄曲霉毒素 照真菌毒素测定法（通则2351）测定。 4.2 本品每1000g含黄曲霉毒素B1不得过5μg，黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素 G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素B1的总量不得过10μg。 4.2.1 仪器与试剂：光化学衍生器、离心机、荧光检测器检测等 本法系用高效液相色谱法（通则0512）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒 素（以黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2 总量计），除另有规定外，按下列方法测定。 4.2.2 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相；采用柱后衍生法检测，①碘衍生法： 衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀 释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；②光 化学衍生法：光化学衍生器（254nm）；以荧光检测器检测，激发波长 λex=360nm（或365nm），发射波长λex=450nm。两个相邻色谱峰的分离度 应大于1.5。 混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲 霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别 为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲 醇稀释至刻度，作为贮备溶液。精密量取贮备溶液1ml，置25ml量瓶中， 用甲醇稀释至刻度，即得。 供试品溶液的制备 取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，置

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4.2.3 4.3 4.3.1 4.3.2 4.3.3

于均质瓶中，加入氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μ1、15μl、20μl、25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液20～25μ1，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量，计算，即得。 (A供?b)?f?1000计算公式：X=k?M样?V二氧化硫残留量：照二氧化硫残留量测定法（通则2331)测定，不得过150mg/kg 仪器与试剂：电热套、竖式回流冷凝管、磁力搅拌器、分析天平、甲基红乙醇溶液指示剂、氢氧化钠滴定液滴、盐酸溶液（6mol/L)等 方法：取药材或饮片细粉约10g(如二氧化硫残留量较髙，超过1000mg/kg，可适当减少取样量，但应不少于5g),精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水300?400ml。打开回流冷凝管开关给水，将冷凝管的上端二氧化硫气体导出口处连接一橡胶导气管置于100ml锥形瓶底部。锥形瓶内加入3%过氧化氢溶液50ml作为吸收液（橡胶导气管的末端应在吸收液液面以下）。使用前，在吸收液中加人3滴甲基红乙醇溶液指示剂（2.5mg/ml),并用0.Olmol/L氢氧化钠滴定液滴定至黄色（即终点；如果超过终点，则应舍弃该吸收溶液）。开通氮气，使用流量计调节气体流量至约0.2L/min；打开分液漏斗的活塞，使盐酸溶液（6mol/L)10ml流入蒸馏瓶，立即加热两颈烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸；烧瓶内的水沸腾1.5小时后，停止加热。吸收液放冷后，置于磁力搅拌器上不断搅拌，用氢氧化钠滴定（O.Olmol/L)滴定，至黄色持续时间20秒不褪，并将滴定的结果用空白实验校正。 计算公式： 二氧化硫残留量（mg/kg）=（V供-V空）×C×0.032×106 W供 式中 V供 为供试品溶液消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； V空 为空白消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； 第 3 页 共 4 页

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5 5.1 5.1.1 5.1.2 5..1.3 5.1.4 c 为氢氧化钠滴定液摩尔浓度，mol/L； W供 为供试品的重量，g。 0.032为lm l氢氧化钠滴定液（lmol/L)相当的二氧化硫的质量，g； 【含量测定】 照高效液相色谱法（通则0512）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以强阳离子交换键合硅胶为填充剂（SCX-强阳离子交换树脂柱）；以乙腈-磷酸溶液（2→1000，浓氨试液调节pH值至3.8）（55:45）为流动相；检测波长为215nm。理论板数按槟榔碱峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备 取氢溴酸槟榔碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含0.1mg的溶液，即得（槟榔碱重量=氢溴酸槟榔碱重量/1.5214）。 供试品溶液的制备 取本品粉末（过五号筛）约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醚50ml，再加碳酸盐缓冲液（取碳酸钠1.91g和碳酸氢钠0.56g，加水使溶解成100ml，即得）3ml，放置30分钟，时时振摇；加热回流30分钟，分取乙醚液，加入盛有磷酸溶液（5→1000）1ml的蒸发皿中；残渣加乙醚加热回流提取2次（30ml、20ml），每次15分钟，合并乙醚液置同一蒸发皿中，挥去乙醚，残渣加50%乙腈溶液溶解，转移至25ml量瓶中，加50%乙腈至刻度；摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含槟榔碱（C8H13N02）不得少于0.20%。 计算公式： A样 × C对 ×f 含量% = ×100% m ×（1－水分）×A对 式中： A样 ------------------------- 样品的面积。 A对 ------------------------ - 对照品的面积。 C对 ------------------------- 对照品的浓度(mg/ml)。 m ------------------------- 样品的重量（g）。 f ------------------------- 稀释体积。

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