SDS

2023-05-29 22:20| 来源: 网络整理| 查看: 265

本试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶设备和蒸馏水即可配胶，大大简化了制胶过程。

背景资料：蛋白电泳经常使用聚丙烯酰胺凝胶来实现蛋白分离，此类凝胶一般由浓缩胶和分离胶两部分组成，前者起到将蛋白样品进行浓缩的作用，后者则是根据凝胶所使用的丙烯酰胺单体和N,N-亚甲基双丙烯酰胺（甲叉丙烯酰胺）交联剂的浓度不同从而分离不同大小范围的蛋白质。

产品组成：

组分30～50gels150～250gels30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺(29:1)100mL500mL4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液(pH8.8)70mL350mL4×Tris-HCl-SDS浓缩胶缓冲液(pH6.8)30mL90mLAPS过硫酸铵0.5g2.5gTEMED四甲基二乙胺0.6mL2.8mL保存：2～8℃，避光，有效期1年。

注意事项：

丙烯酰胺溶液和TEMED有毒，请适当防护。APS溶液不稳定，当配制成10%溶液后，分装成-20℃冻存。尽量减少室温存放时间，以防失效。若是发现凝胶聚合时间明显延长，需要更换使用其它-20℃冻存或者新鲜配置的10%APS。TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。凝胶凝聚的速度与温度、光照、以及TEMED、APS的用量关系密切。在其他组分用量不变的前提下，可通过适当调节TEMED以及APS的用量，控制现有室温条件下凝胶凝聚的速度。可参考附件的量进行相应的调整。温度较低时，4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液和4×Tris-HCl-SDS浓缩胶缓冲液中的SDS可能析出。此时需水浴温育，并在完全溶解和混匀后使用。凝胶配制过程，特别是液体混匀步骤，需尽量避免气泡的产生。在分离胶上层进行水压时需小心操作，加水速度不宜过快。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。本制品仅作科研用途！

使用方法：

根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，参考附表1。按照附表2配制相应浓度的SDS-PAGE分离胶，制胶程序如下：将不同体积的30% Acr-Bis(29:1)、4×分离胶缓冲液和蒸馏水在试管或者小烧杯内混合；加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免气泡产生；在装好的制胶模具中灌入适量分离胶溶液，对于mini胶，分离胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可。然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层，从而压平凝胶表面；静置30～60min，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面，表面凝胶已聚合；按照附表3配制SDS-PAGE浓缩胶，制胶程序如下：去除覆盖在分离胶上的水层。将不同体积的30% Acr-Bis(29:1)、4×浓缩胶缓冲液和蒸馏水在试管或者小烧杯内混合；加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。静置10～20min，等待浓缩胶聚合。待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。可用电泳缓冲液吹走孔内残留的一些胶液(可选)，然后进行上样和后续的常规电泳操作。

附录参考：附表1：不同浓度SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围

SDS-PAGE分离胶浓度最佳分离范围6%凝胶50～150 KD8%凝胶30～90 KD10%凝胶20～80 KD12%凝胶12～60 KD15%凝胶10～40 KD附表2：不同浓度SDS-PAGE分离胶配制体系分离胶浓度凝胶体积(mL)所需各组分体积（单位：mL）蒸馏水30% Acr-Bis(29:1)4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液(pH8.8)10% APSTEMED6%52.71.01.250.050.004105.42.02.50.10.008158.13.03.750.150.0122010.84.05.00.20.0163016.26.07.50.30.0245027.010.012.50.50.0408%52.371.331.250.050.003104.72.72.50.10.006157.14.03.750.150.009209.55.35.00.20.0123014.28.07.50.30.0185023.713.312.50.50.03010%52.031.671.250.050.002104.073.332.50.10.004156.15.03.750.150.006208.16.75.00.20.0083012.210.07.50.30.0125020.316.712.50.50.02012%51.72.01.250.050.002103.44.02.50.10.004155.16.03.750.150.006206.88.05.00.20.0083010.212.07.50.30.0125017.020.012.50.50.02015%51.22.51.250.050.002102.45.02.50.10.004153.67.53.750.150.006204.810.05.00.20.008307.215.07.50.30.0125012.025.012.50.50.020附表3：5% SDS-PAGE浓缩胶配制体系凝胶体积（mL）所需各组分体积（mL）蒸馏水30% Acr-Bis(29:1)4×Tris-HCl-SDS浓缩胶缓冲液(pH6.8)10% APSTEMED21.140.340.50.020.00242.280.681.00.040.00463.421.021.50.060.00684.561.362.00.080.008相关搜索：SDS-PAGE胶制备试剂盒，SDS-PAGE凝胶配制试剂盒，SDS-PAGE Gel Preparation Kit

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